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DWD-1紫外检测仪

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青龙棋牌官网DWD-1紫外检测仪蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸。它们具有吸收紫外光的性质,其吸收高峰在280nm波长处,且在此波长内吸收峰的光密度值与其浓度成正比关系,故可作为蛋白质定性、定量测定的依据,正因为如此,280nm处的紫外吸收法通常被用于层析系统中蛋白质浓度的连续监控。但由于各种蛋白质的酪氨酸和色氨酸的含量不同,故要准确定量,必需要有待测蛋白质的纯品作为标准来比较,或且已经

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蛋白质280nm/254nm双波长测定:

蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸。它们具有吸收紫外光的性质,其吸收高峰在280nm波长处,且在此波长内吸收峰的光密度值与其浓度成正比关系,故可作为蛋白质定性、定量测定的依据,正因为如此,280nm处的紫外吸收法通常被用于层析系统中蛋白质浓度的连续监控。但由于各种蛋白质的酪氨酸和色氨酸的含量不同,故要准确定量,必需要有待测蛋白质的纯品作为标准来比较,或且已经知道其消光系数作为参考。另外,不少非蛋白物质在280nm波长下也有-定吸收能力,可能发生干扰。其中尤以核酸(嘌呤和嘧啶碱)的影响更为严重。在280nm处的吸收比蛋白质强10倍(每克),但核酸在254nm处的吸收更强,其吸收高峰在254nm附近。核酸254nm处的消光系数是280nm处的2倍,

而蛋白质则相反,280nm紫外吸收值大于254nm的吸收值。

通常

纯蛋白质的光吸收比值:A280/A254》1。8

纯核酸的光吸收比值:A280/A254《0。5

因此蛋白质溶液中同时存在核酸时(生物体系大多数如此),必须同时测定OD254nm,与OD280nm。然后根据两种波长的吸收度的比值,通过经验公式校正,以消除核酸的影响而推算出蛋白质的真实含量。

蛋白质浓度=1.45×A280-0.74×A254(mg/ml)

此经验公式是通过一系列已知不同浓度比例的蛋白质(酵母烯醇化酶)和核酸(酵母核酸)的混合液所测定的数据来建立的。

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